在生命科学的探索中，基因功能研究始终是核心命题。从疾病治疗靶点挖掘到作物育种改良，精准解析基因功能至关重要。然而，传统方法如化学诱变效率低下，RNAi 技术又受限于敲低不完全和脱靶效应，难以满足高通量、高精准的筛选需求。

直到CRISPR-Cas9第三代基因编辑技术的出现，彻底改变了游戏规则！相较于 ZFN 和TALEN，它凭借设计简单（仅需20nt sgRNA）、全基因组覆盖、编辑彻底（敲除而非敲低）等优势，成为基因功能研究的 “金标准”。尤其是全基因组 CRISPR-Cas9敲除文库筛选（GeCKO），已被证实比shRNA 筛选结果更一致、验证率更高、假阴性率更低，能真正实现基因的完全失活，让必需基因鉴定更可靠！

想系统开展CRISPR筛选？这张 “流程图” 带你理清关键环节：

CRISPR-Cas9文库筛选的每一个流程，对于筛选的成功都至关重要。在CPRISPR-Cas9文库设计方面有哪些注意事项呢，一一列举。

• 高编辑活性：优选高GC含量、避开同聚物（如≥4个T）

• 低脱靶性：通过生物信息学工具严格比对基因组

• 敲除彻底性：确保切割位点诱导移码突变

• 合成正确率：行业平均突变率5‰时，100nt sgRNA正确比例仅60.6%；君跻基因凭借 1‰突变率，正确率达90.5%！

• 覆盖度：以12万条人全基因组文库为例，99%覆盖度意味着仅丢失120条sgRNA

• 单质粒：操作简便，适用广泛，需注意慢病毒包装量

• 双质粒：需构建Cas9稳转细胞系，需从mRNA、蛋白、编辑效率多维度验证

• 逆转录病毒仅感染分裂细胞，AAV容量小（＜4.2kb）且整合率低

• 慢病毒可感染分裂 / 非分裂细胞，整合稳定，是文库筛选的黄金载体

• 正向筛选：找抗性基因（如药物/病原体耐受）

• 负向筛选：挖关键基因（如细胞生长必需基因）

• 关键：低MOI感染（0.3-0.5）确保单病毒入胞，每组sgRNA细胞感染数>500，平行实验≥2次

   

服务流程：

君跻基因CRISPR sgRNA质粒文库交付标准：

• 覆盖度：≥99%

• 均一性：＜10

• 质粒总量：≥200 μg（无内毒素）

• NGS测序深度：≥300 ×

覆盖度：NGS测序分析sgRNA数量与预期sgRNA数量的比值，越接近100%，说明文库质量越好。

注：均一性对实验的影响：均一性越低，不同sgRNA之间越平均，出现低频sgRNA数目越少，在后续实验过程中由于sgRNA文库质量而丢失的可能性越低，最终分析结果则越接近真实情况。

案例分享：

君跻基因以高精准、高效率、高性价比的一站式服务，让每一个sgRNA 都成为解开基因密码的钥匙！如需了解相关服务详细，可发送邮件至marketing@gentlegen.com或致电：0512-6799 8818转8888。