RNA合成的主要路线是什么？

RNA正在从“信使分子”变成“药物”和“工具”。沉默基因的siRNA、调控剪接的ASO、引导基因编辑的sgRNA，以及带各种化学修饰的普通单链RNA。RNA合成主要有三条路线：

• 化学合成，即亚磷酰胺固相合成，适合约20–100 nt的寡核苷酸，修饰灵活；

• 体外转录，用DNA模板加T7等RNA聚合酶，适合mRNA、sgRNA等较长RNA；

• 酶法连接与酶促合成，用于长链拼接、环化、加帽、加尾。

   

  

化学合成、IVT和酶法合成优缺点是什么？

• 化学合成的优点是序列和修饰可以精确控制，适合siRNA、ASO和带末端修饰的短链RNA；缺点是长度受限、成本随长度和修饰数上升、长链收率低。

• IVT的优点是能一次生成较长RNA，成本相对低，适合mRNA和sgRNA；缺点是产物异质性较高，可能残留DNA模板、酶、NTP和双链RNA，需要纯化，修饰只能通过修饰NTP或转录后酶法引入。

• 酶法合成的优点是条件温和、可引入特殊结构；缺点是效率、规模和序列普适性仍在发展中。

RNA合成中的常见修饰有什么作用？

RNA修饰可分为四类：糖修饰、骨架修饰、碱基修饰、末端/偶联修饰。君跻生物可选单体达近百种。

1. 2'-OMe、2'-F、2'-MOE、LNA、cEt提高核酸酶稳定性和靶标亲和力；

2. PS增强稳定性和蛋白结合，但过多可能增加毒性、补体激活和凝血影响；

3. m1Ψ、m5C等修饰降低mRNA免疫原性并提高翻译；

4. GalNAc实现肝细胞靶向，是siRNA和ASO肝靶向递送的关键；

5. 荧光和生物素用于检测、富集和成像。

但修饰过多可能降低与靶标或蛋白的亲和力，影响RISC加载、RNase H切割、Cas9活性、代谢及增加肝毒性等。

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