转染的最佳使用浓度是多少？

siRNA和ASO的最佳使用浓度没有固定值，通常siRNA在1-100nM之间，ASO在10-100nM之间，需根据细胞类型、转染方法和实验目的等进行预实验优化。

对于易转染的细胞系，可选择较低浓度；对于难转染的细胞系，可能需要适当提高浓度。建议设置多个浓度梯度，在转染后24-48小时检测靶基mRNA沉默效率（qRT-PCR）。在保证有效沉默的前提下使用尽可能低的浓度，以降低脱靶效应和细胞毒性。

转染过程中发现大量细胞死亡，如何处理？

• 调整转染试剂的浓度。转染试剂本身可能具有一定的细胞毒性，尤其是一些阳离子脂质体或高分子聚合物。

• 转染后及时更换培养液。转染复合物与细胞接触时间过长，可能会持续损伤细胞。

• 确保细胞处于良好的生长状态。细胞的健康状态是抵抗外界刺激的基础。转染前应使用低代数（<20代），处于对数生长期且融合度在70-90%之间的细胞。状态不佳的细胞对转染试剂的耐受性显著降低。

• 优化转染试剂与siRNA的比例（N/P比）。转染效率与细胞毒性之间的平衡，很大程度上取决于转染试剂与核酸形成的复合物的电荷比。过高的正电荷比会导致复合物过于密集，提高入胞效率的同时，加剧细胞膜损伤。

什么原因可能导致观察不到预期的效果？

• 浓度过低或作用时间不足，可适当提高浓度或延长作用时间进行尝试。

• 转染效率低，导致细胞内siRNA/ASO含量不足，可优化转染条件，如更换转染试剂、调整转染试剂比例、细胞密度等。

• 目的基因mRNA水平过低，建议实验细胞系中目的基因的Ct值小于30，才能够用于敲低实验，否则建议更换实验细胞系。

• 靶基因存在代偿机制，即使抑制了该基因的表达，其他基因可能代偿其功能，导致表型不明显。

• siRNA/ASO发生降解，可通过琼脂糖凝胶电泳等方法检测其完整性。

• siRNA/ASO序列设计不合理，未有效结合靶mRNA，可重新评估序列设计或更换序列。

一站式平台：从“概念”到“候选分子”的快车道

君跻生物开学季限时活动现已开启，活动期间凡下单RNA合成服务（siRNA定制合成、ASO定制合成、RNA修饰合成），无论金额均可获得积分刮刮卡一张，100%中奖，所获幸运积分可在君跻积分商城兑换实验耗材、科研好物、电子产品等好物，最高可得1000积分！

积分兑换券将随订单一同发放，登录君跻“积分商城”页面，点击“我的积分—积分获取”，输入兑换码即可获取积分，活动时间至2026年10月31日。“君”享好礼，“跻”刻赢取，开学季让君跻生物为你的实验加一点好运。

君跻生物的一站式服务平台，并非简单地将各项服务拼接，而是深度整合了靶点评估、序列设计、合成纯化、活性筛选、序列修饰&偶联等核心能力，真正实现了“即想即得”的研发体验。

对于每一位在核酸药物研发道路上奋力前行的科学家而言，选择一个可靠的伙伴，往往意味着成功了一半。当您下一次为siRNA/ASO的合成与筛选感到困扰时，或许可以记住：君跻生物的一站式平台，已经为您铺好了一条通往终点的“高速路”。如需了解相关服务详细，可发送邮件至marketing@gentlegen.com。